體外培養的細胞受到嚴重污染時(shí)，有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預防是關(guān)鍵。只有將預防措施貫穿于整個(gè)細胞培養的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降到**小程度。一般預防可從以下幾方面著(zhù)手：
1、從物品、用品消毒滅菌著(zhù)手
細胞培養所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在取樣檢菌一周后確認無(wú)菌才能使用。同時(shí)，在無(wú)菌過(guò)濾操作中，隨著(zhù)濾過(guò)體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應選擇**后過(guò)濾的液體進(jìn)行檢測。定期對二氧化碳培養箱進(jìn)行消毒。具體操作：75%的酒精搽拭培養箱后，使用可移動(dòng)的紫外燈**少消毒 30min，加入高壓滅菌過(guò)的超純水于培養箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和硫酸銅加3L滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。
2、添加抗生素
各種抗生素性質(zhì)不同，對各種微生物的作用也不同，聯(lián)合應用比單用效果好，預防性應用比污染后使用好。但反復使用抗生素會(huì )使微生物產(chǎn)生耐藥性，且對細胞本身也有一定影響，因此為避免誘導抗藥細菌，應定期更換培養系統中的抗生素，或盡可能不用抗生素處理。
3、從操作者做起
（1）進(jìn)無(wú)菌室前要徹底洗手，按規定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
（2）操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(cháng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì )產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì )將其帶到培養液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(cháng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養細胞，同時(shí)塑料細胞培養用品也會(huì )產(chǎn)生變形影響使用。
（3）操作時(shí)盡量不要談話(huà)，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
（4）使用培養液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶，開(kāi)瓶后的培養液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養液應立即封閉瓶口，培養的細胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
（5）操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面。
（6） 吸取培養液、細胞懸液時(shí)，應專(zhuān)管專(zhuān)用，一旦發(fā)現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養物之間的交叉污染。
4、防止細胞交叉污染
所有從別處轉來(lái)的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系（株）的傳代工作應由兩人獨立進(jìn)行。
5、無(wú)菌室的徹底消毒
1） 新潔爾滅全面徹底擦洗無(wú)菌室。使用前應稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比，**大的優(yōu)點(diǎn)是便宜，因為新潔爾滅500ml只需5元，而且可以稀釋50倍用，而同樣量的酒精價(jià)格可能是新潔爾滅的幾十倍。
2）甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價(jià)廉，熏蒸消毒時(shí)不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。
其主要用法為：
a）熏蒸消毒：每立方米空間甲醛用量為10~15毫升，熏蒸消毒時(shí)應密閉門(mén)窗封閉**少4h以上。高錳酸鉀加40%甲醛（1:1）混合后放入一開(kāi)發(fā)容器中，立即可見(jiàn)白色甲醛煙霧。消毒后可放入25%氨水蒸發(fā)中和刺激氣味。氨水用量為所用甲醛水溶液的一半，時(shí)間為30分鐘。甲醛氣體毒性非常強，所以操作時(shí)一定需帶上防毒面具。
b）自然揮發(fā)： 將較大量的甲醛水溶液放入一敞開(kāi)容器中，室內溫度保持在18攝氏度以上，同時(shí)室內噴水以保持相對濕度在70%以上，經(jīng)16小時(shí)可達到室內消毒的目的
