細胞培養中常見(jiàn)的污染情況總結如下:
常見(jiàn)的污染如下：
1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會(huì )渾濁變黃，對細胞生長(cháng)影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話(huà)有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的抗生素處理
2、霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間長(cháng)之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B箱的托盤(pán)加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時(shí)轉移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗都于事無(wú)補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作
3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會(huì )渾濁，原體感染，G內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中**常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂(lè )菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養，無(wú)任何不良反應。Sigma公司的使用時(shí)用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話(huà), 建議用8ug/ml的濃度。
4、黑蛟蟲(chóng)：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，且觀(guān)測到的運動(dòng)物無(wú)明顯增多，且培養液顏色、透明度無(wú)明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發(fā)現類(lèi)似現象。對細胞生長(cháng)狀態(tài)不會(huì )有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會(huì )自然消失，除更換血清外無(wú)須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話(huà)，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6、原蟲(chóng)：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多，輕微活動(dòng)，細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng)，只有當他們到達一定的數量時(shí)就會(huì )影響到細胞的生長(cháng)，**終形成惡性循環(huán)。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等
關(guān)于培養基的無(wú)菌狀況，取培養基**培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時(shí)間后觀(guān)察。如果沒(méi)有細菌生長(cháng) 就是操作的問(wèn)題。也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì )影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗結果。
1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內的水應是三蒸水。
2、超凈臺、取材、器材、培養液、培養瓶、操作等因素。
3、超凈臺的風(fēng)機不能過(guò)大，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染。
4、無(wú)菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。
關(guān)于黑膠蟲(chóng)：根據平時(shí)的操作，我覺(jué)得“黑膠蟲(chóng)”有沒(méi)有可能是以下操作細節方面的問(wèn)題導致的呢？
1、有時(shí)候血清瓶或者培養瓶上用標記筆寫(xiě)的字沒(méi)有擦掉就直接泡酸，字跡溶解后沉積在酸缸中浸泡的瓶子里沖洗不凈。
2、過(guò)火的時(shí)候不小心碰到酒精燈的燈芯，粉塵飛進(jìn)培養液內。
3、有的同學(xué)習慣將移液管塞棉花的一端在酒精燈上焚燒一下，灰燼飛進(jìn)培養液內。
我的細胞污染探索。某天打開(kāi)孵箱，看到我的L1210的培養瓶培養液又是黃黃的，覺(jué)得很不錯，今天又可以傳代了，可是在鏡下一看，細胞雖然明顯增加了，但并沒(méi)有象以前那樣長(cháng)滿(mǎn)，而且更讓我心驚的是怎么出現了許多黑色的小點(diǎn)，桿狀，而且好像在動(dòng)來(lái)動(dòng)去，翻轉，旋轉，在細胞很多的地方小點(diǎn)就少，而在細胞較少的地方小點(diǎn)就多，細胞的活力也沒(méi)有以前好了，**反應細菌污染，請實(shí)驗室老師過(guò)來(lái)看，說(shuō)不是細菌污染，這個(gè)點(diǎn)要比細菌的小黑點(diǎn)大的多，也好象不是霉菌，沒(méi)有菌絲，沒(méi)有常見(jiàn)的團壯的生長(cháng)，肯定不對勁，但到底是什么，說(shuō)不上來(lái)。**后，決定換液、洗滌、離心，換瓶，操作結束后鏡下看黑點(diǎn)幾乎看不到了，有點(diǎn)放下心來(lái)。隔天后去看，培養液還和上面的一樣，但鏡下，那種東西又出來(lái)了，在細胞少的地方，幾乎呈現出粗砂粒樣，我欲哭無(wú)淚，知道可能不行了，郁悶的換液后，回家上網(wǎng)·搜，一個(gè)名詞跳了出來(lái)：黑膠蟲(chóng)。黑色、桿狀、運動(dòng)、細胞不會(huì )很快死亡，這些描述簡(jiǎn)直驚人的一致，我確定了，我受到了黑膠蟲(chóng)的襲擊。但黑膠蟲(chóng)是什么，由于網(wǎng)上說(shuō)法不一，我決定探究一下。shou先，培養液略黃，稍有渾濁，鏡下觀(guān)察，細胞還沒(méi)有死，但是已經(jīng)不長(cháng)了，那種東西已經(jīng)是鋪天蓋地了，滿(mǎn)眼望去，盡是粗砂粒樣，細胞好像成了一個(gè)個(gè)汪洋中的小島。細胞涂片，送到化驗室，革蘭氏染色，不久電話(huà)回報懷疑－－真菌。**反應不可能，親自去了化驗室，看到了片上一個(gè)個(gè)瓜子樣的小點(diǎn)，染色呈黑色?？次疫€有些懷疑，化驗室的同事又作了滴片，鏡下暗視野40倍可見(jiàn)一個(gè)個(gè)亮白色芝麻樣的東西在游來(lái)游去，再次涂片染色仍和以前一樣，并且可以見(jiàn)到芽孢樣的形狀，他們確定無(wú)疑是真菌，但不是常見(jiàn)的念珠軍、霉菌，具體是什么，也說(shuō)不上來(lái)。由于已經(jīng)蓋棺定論，計劃的HE染色、支原體沒(méi)有進(jìn)行。已經(jīng)將污染的細胞扔掉了。休整幾天。附照片。
污染后(1)
污染后(2)
染色后
