減少化學(xué)污染
對于自己用粉末配制培養液的實(shí)驗室來(lái)說(shuō),配制培養液要使用重蒸餾水,以減少帶入化學(xué)污染的機會(huì )。如果要添加NaHCO3,要選用純度高的NaHCO3,**好是經(jīng)過(guò)細胞培養測試的。
另外盡量使用一次性的細胞培養器皿。由于標準廠(chǎng)家一次性細胞培養器皿的生產(chǎn)環(huán)境比較嚴格,得到的產(chǎn)品潔凈度很高,從而減少了由細胞培養器皿帶入污染的機會(huì )。
減少生物污染
由于一般的污染發(fā)生在細胞培養的操作過(guò)程中,所以良好的細胞培養操作環(huán)境和操作習慣是減少生物污染的關(guān)鍵。
要用一個(gè)專(zhuān)門(mén)的房間用于細胞培養,注意保持房間的清潔。
要有一個(gè)定期檢驗的合格的超凈臺(超凈臺內的潔凈度應該為100級,與計算機硬盤(pán)的生產(chǎn)環(huán)境相當)。在使用超凈臺前開(kāi)啟通風(fēng)裝置并打開(kāi)紫外燈滅菌30分鐘。操作時(shí)要戴一次性橡膠手套,并噴灑70%酒精消毒。任何帶入超凈臺的非無(wú)菌物件都要噴灑70%酒精消毒。收集廢培養液的瓶子要加入漂白粉或漂白液,以避免微生物的生長(cháng)。每次實(shí)驗完后,要向通向廢培養液瓶的塑料管內噴灑70%酒精,并且用蒸餾水和70%酒精先后擦拭臺面(只用70%酒精擦拭會(huì )導致灑落在臺面的培養液在臺面上形成難以清除的污垢)。
不要在超凈臺里使用酒精燈等燈具,因為這樣會(huì )因燈的熱的火焰引起的空氣對流而破壞超凈臺里本來(lái)規則的空氣層流,使本來(lái)存在于超凈臺底層的微粒被帶到上層,帶來(lái)更多的污染機會(huì )。
加熱培養液的37°C恒溫水浴中非常容易有微生物的生長(cháng),從而成為一個(gè)重要的污染源。所以需要定期清洗恒溫水浴。 細胞培養箱內的用于保持濕度的水盤(pán)也需要定期清洗。為了減少不同細胞株間的相互污染,不要用同一瓶培養液或胰酶培養不同的細胞;不要在一個(gè)超凈臺上同時(shí)進(jìn)行多種細胞的操作。分裝每次小量使用的溶液(如胰酶、抗生素、谷氨酸溶液),以減少多次使用時(shí)污染的機會(huì )。
以防萬(wàn)一
即使再小心,污染難免還是會(huì )發(fā)生。所以得到一個(gè)新的細胞株后的**件事情,是把細胞生長(cháng)擴增后凍存起來(lái),以備不測。