實(shí)驗材料
無(wú)菌物品
1、Eagle's 1 X MEM:用含HCO3 的Hank's液配制 100ml各種規格的、加棉塞的、放入方形吸管筒中的玻璃吸管 1ml、5ml、10ml、25ml或單獨包裝的塑料吸管
2、培養瓶(若用于實(shí)驗操作1,需預先稱(chēng)) 25cm2
非無(wú)菌的物品
移液器或吸耳球；70%乙醉噴霧瓶；不起毛的棉簽;吸水性好的紙巾;裝有水和消毒劑的吸管筒、剪刀、抗乙醇的記號筆、筆記本、鋼筆、實(shí)驗指導等.
操作步驟
1.用棉簽或紙巾隨蘸 70% 乙醉擦拭工作面和潔凈臺內面.包括前屏板的內面.
2.從冷藏室、水摘或冷凍箱內取出培養基等.解凍.用70%乙醉擦洗瓶子,并把馬上要用到的物品放到潔凈臺內.
3.挑選吸管,放到工作面一側易于幸到的位置(圖6.2).
(a)如果是玻瑞吸竹,打開(kāi)吸管盒,把蓋子放在其上或一邊,開(kāi)n向下;
(b)如果是塑料吸管,除去外包裝,按規格、型號分類(lèi),把包襄著(zhù)的吸竹擺放在架子上或盒子中.
4.選出你需要的其他玻璃器皿、嫂料制品儀器設備等.把它們放在近旁的手推車(chē)或工作臺上
5.松開(kāi)(但不移走)所有待用的瓶子的蓋子.
6.去掉待移液的試荊瓶或培養瓶的蓋子,口朝上放到潔凈臺單邊、試劑瓶后面的}
工作臺上,以保證手不會(huì )從其上方通過(guò).如果某一時(shí)問(wèn)僅打開(kāi)一個(gè)瓶蓋,可以把蓋子夾在小指和手掌構成的彎中(圖6.6),待移液完成后,把它重新蓋回到原瓶子上.
7.選擇吸管.
（a）如果是玻璃吸管,從盒中取出吸管時(shí).要保持待取吸管在盒中與其他吸管平行,并盡叮能少地接觸他們,特別是吸管頭部,如果拿著(zhù)的吸管接觸了其他仍在盒內的吸管尾端.則不能再使用它;把吸管插人移液器中,吸竹指向你的外側,握在刻度上面部分,這樣,吸管進(jìn)人試劑瓶或培養瓶的部分將不會(huì )被污染(圖6.9).
(b)如果是塑料吸管,打開(kāi)包裝的上部,向外折,然后往下剝.將近剝到下方時(shí),將吸竹端部插人吸耳球或移液器中,從包裝紙中取出吸管,不要使吸管接觸包裝的外面部分或非無(wú)菌工作面,**后,將包裝紙丟進(jìn)廢物筐中.
安全提示：將吸管擂入吸耳球或移液器時(shí),不要太用勁,知果用力太大.吸告會(huì )破裂(圖7.1.7.5.3節).
8.把吸管插在吸耳球或移液器上時(shí),要使吸管保持合適的角度.并一直要注愈吸管的位置,不讓吸管**接觸試劑瓶外面或沾凈臺的內表面(圖6.9中劃圈區域).如果是初學(xué)尤菌技術(shù)者.做到這一點(diǎn)并不容易,但它是成功的必要條件,并可在實(shí)踐中取得經(jīng)驗9.使試劑瓶向吸管傾斜,以便操作者的手不會(huì )移到瓶子的敞口上方.如果用一容址為sm】的吸竹吸取sm!培養液并轉移到25cm2的培養瓶中時(shí),培養瓶也同樣要傾斜.
10.重復上步操作,并向另外4個(gè)培養瓶移液.如果要把液體移到數個(gè)瓶子中,可把這些培養瓶立著(zhù)放置.一定要把它們放在沽凈臺的較內側區城,而且不能使手在瓶子開(kāi)n的上方移動(dòng)(若用于練習1,要記錄下來(lái)向5個(gè)培養瓶移液持續的時(shí)間).
11.把用過(guò)的吸管棄人裝有消毒劑的吸管筒中.如果是塑料吸管.則丟進(jìn)雙倍加厚的可高溫滅菌的生物危害袋中.
12.重新把培養瓶的蓋子蓋好.
13. 重復以上操作,用25ml的吸管分別向 5 個(gè)培養瓶轉移 5ml 溶液.
14.重新把試刑瓶或培養瓶的蓋子蓋好.
15.實(shí)驗完畢后,擰緊所有瓶子的蓋子,井從工作面上移走所有不需要的溶液和實(shí)驗材料.
16.如果要進(jìn)行細胞培養的操作,則需稱(chēng)**培養瓶,檢查所分裝培養基的精確性,并于37℃放置 1 周,以檢查可能的污染.
注意事項
對在垂直式潔凈臺中操作來(lái)說(shuō)，不要立即在開(kāi)口器皿的上方操作.
對在水平式沽凈臺中操作來(lái)說(shuō),，不要在開(kāi)口器皿的后方操作.
