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    超凈工作臺在細胞培養實(shí)驗中的應用


    植物(plant)組織具有無(wú)限增殖和產(chǎn)生不定芽、不定根的能力。凈化工作臺的原理:潔凈環(huán)境是在特定的空間內,潔凈空氣(進(jìn)濾空氣)按設定的方向流動(dòng)而形成的。以氣流方向來(lái)分,現有的超凈工作臺可分為垂直式,由內向外式以及側向式。在培養條件(tiáo jiàn)適宜時(shí),只要通過(guò)一個(gè)超凈工作臺,以及用一個(gè)芽可以培養出許多植株來(lái)。其在保持優(yōu)良砧木及品種種性、進(jìn)行工廠(chǎng)化育苗方面具有很好的意義。
     
    超凈工作臺在細胞培養實(shí)驗中的應用方法步驟(procedure)如下:
     
       
      一、外植體接種與材料(Material)消毒(disinfection)
       取田間當年生新梢或一年生枝蔓,去葉,用肥皂水將表面(appearance)刷洗,并用自來(lái)水沖洗干凈,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,拿進(jìn)超凈工作(gōng zuò)臺;先用70%酒精過(guò)一下,無(wú)菌(fungus)水(用高壓鍋,在120℃下,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%升汞液消毒(disinfection)5~10分鐘,無(wú)菌水沖洗3遍;然后用酒精燈(Alcohol lamp)火焰消毒過(guò)的工具(鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等)剝去鱗片、葉柄,取出帶數個(gè)葉原基的幼芽接入培養基,半包埋。
     
       培養基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管,裝入量為1~2厘米高。凈化工作臺用途:廣泛適用于醫藥衛生、生物制藥、食品、醫學(xué)科學(xué)實(shí)驗、光學(xué)、電子、無(wú)菌室實(shí)驗、無(wú)菌微生物檢驗、植物組培接種等需要局部潔凈無(wú)菌工作環(huán)境的科研和生產(chǎn)部門(mén)。也可連接成裝配生產(chǎn)線(xiàn)具有低噪聲、可移動(dòng)性等優(yōu)點(diǎn)。120℃滅菌(Sterilization)(fungus)30分鐘后備用。
     
       外植體接種后放到培養室的培養架上培養。培養條件(tiáo jiàn)為:光照1000勒克斯,8~10個(gè)小時(shí),暗14~16小時(shí);溫度(temperature)25~28℃。培養1~2周,即可看出是否消毒(disinfection)徹底,有無(wú)感染。及時(shí)巡查,將未感染的外植體轉接到新的培養瓶?jì)?,丟棄已感染的外植體。
     
       
      二、繼代繁殖
       上述接入的外植體培養1~2個(gè)月,即可長(cháng)到2~3厘米長(cháng)。在超凈工作(gōng zuò)臺上,將其剪成約1厘米長(cháng)莖段,接種到新的培養基中(培養基的配方同上)。剪莖段時(shí)所用工具和培養皿(或牛皮紙)都要經(jīng)過(guò)消毒,消毒方法分別同上述酒精(術(shù)語(yǔ)稱(chēng)乙醇)燈消毒法和高壓消毒法。
     
       其后,大約每25天左右進(jìn)行一次繼代培養。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復進(jìn)行,直到所需數量。
     
       
      三、生根
       上述培養的莖段長(cháng)到2厘米以上時(shí),即可用于生根。生根培養基的成分為上述培養基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,其他成分不變。
     
       生根培養基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用。
     
       生根培養20天左右,莖段上即可長(cháng)出根,成為完整苗。生根苗長(cháng)到3~5厘米長(cháng)時(shí)即可鍛煉、移栽。
     
       
      四、生根苗的鍛煉、移栽
       (一)鍛煉
     
       組培苗在人工培養條件(tiáo jiàn)下長(cháng)期生長(cháng),對自然生長(cháng)環(huán)境(environment)的適應性減弱。超凈工作臺是為了適應現代化工業(yè)、光電產(chǎn)業(yè)、生物制藥以及科研試驗等*域對局部工作區域潔凈度的需求而設計的。移栽前需要一個(gè)過(guò)渡階段,即鍛煉。鍛煉方法(method)為:將培養瓶移**自然光照下2~3天,打開(kāi)瓶口2~3天,再移栽。
     
       (二)移栽
     
       移栽時(shí)先洗凈根上培養基,避免(avoid)培養基感染雜菌(fungus)致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽(yáng)等管理同實(shí)生苗移栽。但注意(attention)組培苗比較嬌嫩,需輕盈操作。
     
       
      五、工廠(chǎng)化育苗
     
    將上述培養基制備及超凈工作臺相關(guān)(related)、裝瓶、消毒(disinfection)、無(wú)菌(fungus)苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過(guò)程全部放在實(shí)驗(experiment)室和溫室中進(jìn)行,即為工廠(chǎng)化育苗。目前,這樣的生產(chǎn)線(xiàn)已在意大利和法G投入使用。但外植體接種尚需人工操作。
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